大密度级次超声波对极细微构体构架酶材料的制

　　材料与方法细粒棘球绦虫原头节包囊采自青海省西宁市某屠宰场感染细粒棘球蚴病的羊肝。用无菌术直接从包囊抽出囊液和原头节，0.4台盼蓝染色，检查原头节活力。若活原头节数量超过90，即可进行实验。

　　超声辐照系统JC型聚焦超声肿瘤治疗系统（简称海扶刀）由重庆医科大学医学超声工程研究所设计制造提供。聚焦超声治疗头能将电能转化为声能，通过透镜聚焦，形成高能聚焦点。治疗头直径150mm，焦距为110mm，功率0-250W，可调，焦点大声强范围500015000W/cm2，安装于盛循环脱气生理盐水的容器底部，并可在X、Y、Z3个方向上随意运动。实验中全部采用连续波，声波由治疗头自下向上发出，盛装原头节悬液之聚乙烯试管固定于治疗头焦域内，焦点对准试管内悬液的中心进行辐照。超声换能器的工作频率为0.8MHz.

　　实验方法将囊液和原头节混匀成悬液，计数，原头节密度约为40005000个/ml，分装于无菌聚乙烯试管中，每管1.5ml，共6组。根据前期进行HIFU杀伤原头节的实验结果，我们选择50W@10s作为本次实验中不致原头节即刻杀伤的大超声波剂量，即采用治疗声功率50W，辐照时间10s，定点点打方式辐照原头节悬液，对照组予以假照。

　　标本制备及酶组织化学染色照射后轻轻混匀悬液，立即将原头节均匀涂于预先用多聚赖氨酸处理过的防脱载玻片上，每组涂片6张，行酶组织化学染色检测酶活性。酸性磷酸酶活性检测采用MacDonald（1950）改良的Gomori法，琥珀酸脱氢酶活性检测采用硝基蓝四唑法，葡萄糖6-磷酸酶活性检测采用Wachstein及Meisel（1956）法1102.以作用液中不加反应底物的结果作为阴性对照，所有切片均在相同的条件下平行操作。试管内剩余悬液经0.4台盼蓝台染色约2min分钟涂片，低倍镜下观察辐照后原头节的形态及活力。

　　SDH的失活将导致细胞能量代谢障碍，终使细胞死亡。酶组织化学发现细粒棘球绦虫原头节特别吸盘部位具有较强的SDH活性，棘球蚴具有经典的三羧酸循环，虫体蠕动、吸盘伸缩等肌肉收缩所需能量多数来源于三羧酸循环和呼吸链完全氧化。

　　不致原头节即刻杀伤的超声波剂量使SDH酶活性减弱，干扰三羧酸循环和呼吸链完全氧化从而影响虫体蠕动、吸盘伸缩运动等。这与我们前期的不致原头节即刻杀伤的超声作用后体外培养存活的原头节的活动能力降低的观察结果相符。

　　葡萄糖6-磷酸酶是一种催化多种磷酸化合物水解的磷酸酶，催化糖原分解为葡萄糖，是糖代谢关键酶，反映细胞有氧代谢及能量供应状况。不致原头节即刻杀伤HIFU作用后原头节依然存活，但G-6-P活性与对照组比较明显降低，这必将影响原头节细胞糖代谢的正常进行，从而影响棘球蚴的能量代谢。

　　酸性磷酸酶ACP参与糖及其他物质的吸收和转运及碳水化合物的代谢，此种酶活性降低，影响寄生虫对葡萄糖及其他营养物质的摄取1112.另一方面，酸性磷酸酶是溶酶体的标志酶，反映溶酶体的功能状态，当细胞受损发生变性坏死时，溶酶体的数量增加，功能活跃，表现为ACP活性升高，可能导致细胞膜通透性增高，促进细胞器分解。HIFU辐照前后酸性磷酸酶活性变化无显著差异，可能HIFU辐照对原头节酸性磷酸酶确无影响，也很可能是HI-FU辐照使酶活性降低同时HIFU辐照损伤细胞使酶活性升高，终呈现为一个酶活性既不升高也不降低的观察结果。其确切机制有待进一步探索。